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影響到熒光顯微鏡成像效果的因素
點(diǎn)擊次數(shù)：3306 更新時(shí)間：2019-06-20
影響到熒光顯微鏡成像效果的因素
影響熒光顯微鏡成像的熒光因素很多，主要包括：熒光樣品的制備，熒光光源的選擇，濾片轉(zhuǎn)盤的設(shè)計(jì)，熒光濾片的組合策略（激發(fā)光濾片，發(fā)射光濾片，雙色鏡分光濾片，帶寬選擇），顯微鏡物鏡種類，顯微鏡攝像系統(tǒng)的選擇等問題。熒光的激發(fā)、濾光、成像、淬滅，熒光實(shí)驗(yàn)的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到好的效果，其中影響到成像效果的一個(gè)重要因素即是熒光光源。
熒光顯微鏡的常用光源通常都是白光光源：高壓汞燈，氙燈，金屬鹵素?zé)艉蚻ed白光光源以及的led單波長光源。
1、汞燈
超高壓汞燈（50-200w），它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充一定數(shù)量的汞，工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電，引起汞蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當(dāng)汞*蒸發(fā)時(shí)，可達(dá)50～70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力，這一過程一般約需5～15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使汞分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì)，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。推薦產(chǎn)品：歐司朗50w，103w，200w汞燈，適用于各大廠家熒光顯微鏡；一般200小時(shí)壽命
2、氙燈
氙燈和汞燈做為白光源，都能提供從紫外到近紅外一系列波長的光，但它們卻有著不同的激發(fā)光譜。汞燈集中在近紫外、藍(lán)光以及綠光附近，這種在峰值的高激發(fā)能量確保產(chǎn)生明亮的熒光信號(hào)，但光毒性卻很強(qiáng)。因此，hbo用來對(duì)固定樣品或弱熒光成像。相比而言，氙燈光源的激發(fā)比較平緩，可以用于不同波長間強(qiáng)度的比較，例如用于鈣離子濃度測量等。氙燈的強(qiáng)激發(fā)在近紅外800-1000nm。
3、金屬鹵素?zé)?/div>
目前各大顯微鏡品牌廣泛使用的一種光源，它和汞燈的激發(fā)光譜很像，但它和顯微鏡以光纖相連，能散熱，壽命更長。光纖從光源連到顯微鏡上，可以大量減少光產(chǎn)生的熱能。金屬鹵素?zé)魧?duì)活細(xì)胞成像的另一個(gè)優(yōu)勢是內(nèi)置強(qiáng)度設(shè)計(jì)裝置，可以容易調(diào)節(jié)激發(fā)光。也可以通過選擇直接連接獲得更好的激發(fā)效果。
4、led白光熒光光源：這種光源的開關(guān)在毫秒間，減少樣品在光照下的暴露時(shí)間，延長壽命。另外，led光的衰減即快又，長期活細(xì)胞試驗(yàn)下可大大減少光毒性。和白光相比，led僅僅在一個(gè)較窄的光譜激發(fā)，多個(gè)led波段使得led光源能為多色熒光提供應(yīng)用。
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